俄罗斯专享会284 DNA提取试剂盒操作简述

整个流程大约需要1小时，包含细胞均质化、细胞裂解、去除蛋白质和DNA纯化等步骤，具体内容如下所述。

细胞均质化和裂解

在提取基因组DNA时，不同来源的样品需采用不同的均质化步骤，具体如下：

从动物组织中提取基因组DNA

使用研钵进行均质化时：
① 取1～100mg的动物或人类组织，放入预冷的研钵中，快速且有力地研磨成均质液。
注：对于以下组织，需先用液氮研磨至粉末状：A. 富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织；B. 富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织；C. 富含角质蛋白或其它坚硬组织（如骨骼）。
② 加入650μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1，温和研磨30秒。
注：处理上述①中的材料时，加入SolutionA和RNaseA1后，应将研钵置于65℃水浴中研磨1分钟。
③ 收集650μl的均质液至CollectionTube中，如果均质体积不足650μl，请补充SolutionA至650μl，保持在65℃5分钟。

使用研磨棒进行均质化时：
① 取1～100mg的动物或人类组织，放入预冷的CollectionTube中，用研磨棒研磨成糊状。
② 加入350μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1后，继续用研磨棒快速研磨成均质液。
③ 添加350μl的SolutionA，将研磨棒上的均质液冲入CollectionTube中，充分混合后，保持在65℃5分钟。

从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA

① 根据下表称取适量的新鲜植物材料（如使用冷冻干燥的植物材料则用量减半），将其剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品完全冷冻后快速且有力地研磨至粉末状，期间应间歇性加入液氮以防止融化。
植物材料种类与用量：
- 植物花、叶片：10～100mg
- 植物茎：60～240mg
- 植物根：80～240mg
- 植物种子：80～240mg
注：若选择根、种子等样品，因其基因组DNA含量低，需使用超出表格中建议的量，分两管进行实验。步骤7中再将各管溶液合并过滤至同一SpinColumn以使基因组DNA结合到同一位置。
如果从培养的植物细胞提取DNA，需离心收集2×10^3～1×10^7的细胞，加入150μl水后充分悬浮，移入研钵中，并加入液氮研磨成粉末状。
注：确保样品研磨充分，以提高基因组DNA的收率。

② 将研钵移至65℃水浴，待样品粉末开始融化时，加入700μl的SolutionA和12μl的RNaseA1，并有力碾磨30秒。
③ 收集650μl研磨后的均质液至CollectionTube中，若不足650μl，请补充SolutionA，保温65℃15分钟。
注：处理富含纤维的根/茎或富含淀粉及蛋白质的种子时，可延长水浴时间至60分钟。

从全血中提取基因组DNA

① 取10～250μl的全血（含抗凝剂）加入CollectionTube。
② 加入500μl的SolutionA。
③ 添加1μl的RNaseA1，激烈摇晃15秒后进行冰浴5分钟。
注：人和动物的抗凝全血一次处理量≤250μl，禽类及两栖类的抗凝全血为≤10μl。

从培养细胞中提取基因组DNA

使用悬浮培养的动物细胞时：
① 使用CollectionTube收集1×10^5～1.5×10^7的细胞悬浮液，5,000rpm离心5分钟，弃去上清。
② 加入150μl的灭菌蒸馏水或PBS以悬浮细胞。
③ 加入500μl的SolutionA和0.8μl的RNaseA1，激烈混合15秒后，室温静置1分钟。

此文档由俄罗斯专享会284提供，确保每一步都精准、高效地提取基因组DNA，以满足生物医疗研究的高标准需求。