四环素检测试剂盒使用说明 - 俄罗斯专享会284
俄罗斯专享会284的四环素类检测试剂盒说明书（酶联免疫法）主要用于检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs）。该试剂盒采用间接竞争ELISA方法，并由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及相关试剂组成。
1. 原理与用途
在检测过程中，添加标准品或样品溶液。样本中的四环素类药物与酶标板上预包被的偶联抗原竞争抗体，随后加入酶标记物。通过TMB底物显色，样本的吸光度值与其四环素类药物含量呈负相关。借助标准曲线可计算出样本中的药物残留量。
2. 技术指标
2.1 灵敏度
灵敏度达到0.05 ppb (ng/ml)。
2.2 反应模式
反应条件为37℃，反应时间为30分钟、30分钟和15分钟。
2.3 检测下限
- 组织、肝脏、鸡蛋：2 ppb
- 蜂蜜：2 ppb
- 尿样：0.5 ppb
- 牛奶：2 ppb
- 奶粉：4 ppb
2.4 交叉反应率
- 四环素：100%
- 强力霉素：70%
- 金霉素：10%
- 土霉素：10%
2.5 样本回收率
- 组织：85±20%
- 肝脏、鸡蛋：75±20%
- 蜂蜜：85±20%
- 尿样：80±20%
- 牛奶、奶粉：75±20%
3. 试剂盒组成
- 酶标板：96孔
- 高浓度标准品溶液1瓶：100 ppb
- 标准品溶液包括：0 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.2 ppb、0.4 ppb、0.8 ppb
- 酶标记物（红盖）：11 ml
- 抗体工作液（蓝盖）：55 ml
- 底物液A（白盖）：6 ml
- 底物液B（黑盖）：6 ml
- 终止液（黄盖）：6 ml
- 20×浓缩洗涤液（白盖）：40 ml
- 5×复溶液（黄盖）：50 ml
- 说明书：1份
- 盖板膜：1张
- 自封袋：1个
4. 所需器材与试剂
4.1 仪器
酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、移液管、天平（感量0.001g）。
4.2 微量移液器
单道: 20 µl-200 µl，100 µl-1000 µl；多道: 300 µl。
4.3 试剂
浓盐酸、无水甲醇。
5. 样本前处理
5.1 样本处理前须知
实验器具应清洁，并使用一次性吸头，避免污染以干扰实验结果。
5.2 配液
5.3 样本前处理步骤
组织、肝脏、鸡蛋：按步骤处理并加入复溶液。
蜂蜜：严格控制样本量并进行混合。
尿样：用复溶液稀释10倍，确保清亮后再进行分析。
牛奶：样本处理同样严格，稀释确保充分混合。
奶粉：取样严格，并完成混合和稀释步骤。
6. 酶联免疫试验步骤
确保试剂从4℃环境回温，并对洗涤液进行重混。按照标准步骤添加样本并标记微孔。反应过程中要注意避免光照和使用过期试剂。确保每一步操作均匀、彻底。
7. 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
采用标准吸光度值与样本平均吸光度值进行计算，以获得百分比。
7.2 标准曲线绘制
以标准液的百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制半对数曲线图，从中可得样本实际浓度。
8. 注意事项
- 室温低于25℃会影响结果。
- 洗涤时避免孔内干燥，确保结果稳定。
- 所有孵育期间需避免光照。
- 切勿使用过期或不同批次的试剂。
- 终止液有腐蚀性，应避免皮肤接触。
9. 贮藏与保存期
试剂盒应保存在2-8℃，避免冷冻。有效期为1年，具体生产日期见包装盒。
为确保检测结果的准确性和可靠性，请遵循以上操作步骤并注意实验条件。参考俄罗斯专享会284的样本检测建议，实现高效的实验操作与结果分析。
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