随着TaqDNA聚合酶与PCR技术的完美结合,PCR不仅成为科学研究的重要工具,也在医学领域如病原微生物检测、遗传基因检测和肿瘤伴随诊断等方面广泛应用。此外,它在法医学、环境监测和食品安全等领域的需求不断增加。为了满足客户对高效、便捷的要求,全预混试剂逐渐取代了传统的分步法试剂,成为市场的主流。
在应对新冠疫情、非洲猪瘟等重大公共卫生事件时,检测机构对全预混试剂的稳定性更加重视。抗体热启动修饰的TaqDNA聚合酶因其能够部分解决PCR扩增中的非特异性问题,已在多种实际应用中得到广泛推广。然而,常规探针法检测试剂中的Taq酶5’→3’核酸外切酶活性可能导致引物和探针等关键材料的降解,进而降低扩增效率和试剂稳定性。在当前市场竞争激烈的环境下,试剂制造商被迫提高产品的稳定性,促使全预混试剂必须能够在4℃下加压14天或37℃下加压7天后仍保证良好的检测性能。
为此,国内外企业不断开展研究,探索更高效的Taq酶抗体,希望能够完全封闭Taq酶的5’→3’聚合活性和5’→3’核酸外切酶活性。自新冠疫情以来,市场上不同厂商相继推出了双功能封闭抗体产品,但普遍存在封闭效果不理想的问题,或是聚合酶与外切酶活性的封闭效率不能同时达到90%以上,或是在高于55℃的环境中,抗体与Taq酶失去结合,效果减弱。
为提升PCR试剂的性能,瀚海新酶运用B细胞克隆技术,通过Beacon单细胞光导系统筛选出符合要求的B细胞,构建cDNA线性表达框,完成抗体筛选与验证研究。研究团队惊喜发现,不同Taq酶抗体之间存在一定的协同作用。尽管普遍认为,通过混合能分别完全封闭聚合酶与外切酶活性的抗体即可有效解决问题,但实践结果较为 disappointing。而我们在适当添加第三株抗体后,显著提升了Taq酶双功能封闭的效果。
经过精心筛选和组合,瀚海新酶全封闭Taq酶抗体由三株抗体以优化后的比例组合而成。与市场上单株或双株抗体混合的产品相比,该款产品在70℃下可同时封闭Taq酶99%以上的聚合活性和外切酶活性,展现出更高的封闭效率和稳定性,确保有效防止因引物探针等关键成分降解导致的非特异性扩增信号损失。同时,该抗体能够快速释放酶活,95℃热激30秒即可释放95%以上的酶活,增强了扩增灵敏度。
瀚海新酶的全封闭TaqDNA聚合酶抗体在5’→3’核酸外切酶和聚合酶活性检测中,均能在70℃下实现双向完全封闭,封闭效率大于99%。该抗体适配不同类型的TaqDNA聚合酶,封闭效率均超过99%。相较于化学修饰,抗体封闭具有快速释放酶活、不损伤酶的优势。经过严格的质量控制,瀚海新酶确保了抗体产品的浓度、纯度及功能检测等各项指标的达标,特别是检测相关核酸酶残留和宿主核酸残留,防止对下游应用造成污染。
在具体的应用案例中,瀚海新酶的全封闭抗体修饰的热启动Taq酶在多个实验中优化了性能。例如,与同类产品相比,瀚海新酶的抗体在更高温度下仍能保持稳定性,有效防止扩增效率的降低。此外,在法医领域应用中,全封闭抗体修饰的Taq酶在多重扩增体系中显著减少了非特异扩增产物,确保了结果的准确性。有关这些性能的详细研究与分享将进一步推动产品的应用。
总之,瀚海新酶以其独特的抗体技术,推动了PCR试剂的发展,实现了对TaqDNA聚合酶的高效封闭,为生物医疗研究提供了更可靠的解决方案,正不断引领行业的创新与进步。通过持续的探索与努力,瀚海新酶将在未来进一步优化产品性能,满足更广泛的市场需求。