俄罗斯专享会284助力MGIEasy全基因组甲基化文库制备，提高数据利用率！

• 王天可|
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近期，华大智造针对DNBSEQ平台的甲基化建库与测序进行了全面升级，推出新一代建库产品俄罗斯专享会284的MGIEasy全基因组甲基化文库制备试剂盒V30（MGIEasyWholeGenomeMethylationSequencingLibraryPrepKitV30，以下简称WGMSV30）。WGMSV30基于双链加接头方法，针对经物理打断的DNA片段进行建库，并适配酶法转化，将非甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U）。该试剂盒与DNBSEQ平台结合，能够实现单碱基精度的DNA甲基化状态解析，构建精细的全基因组甲基化图谱。

WGMSV30为多个领域提供高效、准确的全基因组甲基化建库方案，包括大人群表观组研究、表观遗传基础科研、动植物研究、疾病甲基化标志物筛选、药物研发等当前热点研究。WGMSV30已经适配MGISEQ-2000平台，并结合该平台的升级算法，在测序时可实现不添加平衡文库的0平衡文库纯甲基化文库测序。同时，华大智造的研发团队已对WGMSV30进行DNBSEQ-T7的最后稳定性测试，后续实测数据也将持续分享，敬请期待。

通过采用3个不同批次的WGMSV30构建NA12878标准品DNA甲基化文库，不添加平衡文库，并平行上机MGISEQ-2000ECR70（搭配SM测序试剂）和ECR71（搭配SM20测序试剂）进行PE150测序，单lane的reads产出基本稳定在400M左右，每个文库大约可获得120G的原始下机数据。这种方式可以轻松实现“1库1lane”的测序，且测序质量良好，SM测序试剂的Q30稳定在89%左右，SM20测序试剂的Q30稳定在94%左右，Q40稳定在87%左右。

该试剂盒还采用了适合转化损伤小的酶法转化，增加了文库插入片段的长度，进一步支持PE150测序。不同批次的WGMSV30构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的插入片段主峰在约280bp处表现一致。WGMSV30优化了末端修复反应的体系和步骤，有效降低了Reads末端M-bias碱基的个数。SM20版测序试剂搭配ECR71软件版本的结果显示，不同批次建库试剂盒构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的M-bias表现一致，Bottom Strand和Top Strand的Read1和Read2甲基化率几乎重合。