人结肠腺癌细胞LS1034培养指南 - 俄罗斯专享会284
俄罗斯专享会284人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书
一、细胞培养条件
细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代
传代情况：每两天更换培养基
备注：用无菌离心管收集瓶内培养基以供对比培养，若对比效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
收到细胞后，应将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在开启细胞瓶之前，使用75%酒精喷洒瓶体进行消毒，随后将细胞瓶置于超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞图像（最好各拍摄40x、100x、200x的照片），前三天的照片为售后重要依据，若未提供照片则默认收到状态良好。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代：
若细胞未达到80%的汇合度，收集培养瓶内的完全培养液至离心管中，并保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2的培养箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次清洗。
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，并在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分已变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
- 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存：
- 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，并用PBS洗涤细胞一次；
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞收缩变圆后加5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打使其脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
- 弃上清， 将细胞沉淀重悬于1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入。
c、细胞复苏：
- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁；
- 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
- 弃上清，沉淀重悬于5ml完全培养基后接种至T25培养瓶中，放置于37℃、5% CO2培养箱中；
- 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。
四、注意事项
部分细胞对附着力要求较高，在运输过程中可能会发生细胞脱落，属正常现象。若显著脱落，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期进行对比培养），沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，添加5ml完全培养基终止消化。再次离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基。
五、售后条款
1）细胞出现问题的可重发情况：
1. 运输途中问题，如细胞丢失、瓶身破损等，重发；
2. 细胞污染问题，需在收到48小时内提供真实结果，经核实后重发；
3. 常温发货细胞在静置24小时后，及干冰发货细胞在复苏24小时后仍大部未存活（需提供清晰照片），重发；
4. 凡在复苏后污染的细胞，重发；
5. 活性问题需在7天内提供真实结果，细胞活力需要经过台盼蓝染色法鉴定，核实后重发；
6. 收到细胞时及2、3天请拍照，3天内未告知视为合格；
7. 问题如提供前三天及问题时的照片和操作步骤交由技术人员判定，责任归我方则重发。若责任归双方，则协商处理或按合同价的50%收取重发费用。
2）不予重发的情况：
1. 客户自行造成细胞污染，不重发；
2. 操作不当导致细胞状态不佳，不重发；
3. 非本库推荐培养体系导致细胞状态不佳，不重发；
4. 细胞状态不佳且未提供前三天照片，不重发；
5. 在培养过程中有其它处理的，不重发；
6. 收到后两天内未告知，不重发；
7. 具体情况另行判定。
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